### 产品及特点

尊龙凯时推出的检测试剂盒，基于探针法荧光定量PCR原理开发，拥有以下独特优势：

1. **即开即用**：用户只需提供样品DNA模板，无需复杂的前期准备。
2. **高灵敏度**：经过优化的引物和其他组分，确保检测灵敏度大幅提升。
3. **阳性对照**：附带阳性对照，便于迅速甄别假阴性样品。
4. **高特异性**：引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区域，确保不会与其他生物样本DNA发生交叉反应。
5. **双重检测功能**：产品既可用于定性检测，又可用于定量检测。在定量检测时，线性范围至少达到5个数量级。
6. **充足的反应次数**：本产品可支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
7. **科研专用**：本产品仅限于科研使用。

### 方法

**一、DNA提取（样本制备区）**
用户可采用自行选择的纯化方法提取样品DNA，本试剂盒与市面多数核酸提取剂兼容。

**二、稀释标准曲线样品（样本制备区）**
为防止污染样品或本试剂盒的其他成分，阳性对照浓度较高的稀释操作需在独立区域内进行。

1. 标记六个离心管，编号为7、6、5、4、3、2。
2. 用带芯枪头各加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL 1×10E8拷贝/μL的阳性对照，震荡1分钟，制得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品，置于冰上待用。
4. 在6号管中加入5μL 1×10E7拷贝/μL的阳性对照，震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的样品，置于冰上待用。
5. 在5号管中加入5μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照，震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的样品，置于冰上待用。
6. 按上述方法重复操作，直至获得六种稀释度的标准样品。如不需制作标准曲线，可将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL。

**三、试剂配制（试剂准备区）**
根据待检样品数量N，准备N+2个qPCR管（N个待检样品+1个阴性对照+6个阳性对照），向每个PCR管中加入相关成分（详细说明书可向尊龙凯时索取），然后转移至样本准备区。

**四、添加模板（模板添加区）**
向各qPCR管中加入2μL模板，添加顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板、婴儿利什曼虫qPCR阳性对照。离心30秒后，立即进行扩增反应。

**五、扩增反应（扩增及产物分析区）**
将PCR管放置于PCR扩增仪器的样品槽中，执行扩增，详见扩增程序（请参考尊龙凯时提供的详细说明书）。

**六、结果分析**
1. 若制作标准曲线，以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线。通过待测样品的Ct值推算DNA浓度的log值。
2. 未制作标准曲线时，根据以下标准判定结果：
阳性对照结果：Ct值<30，表现出明显指数增长且呈典型S型曲线。
阴性对照结果：Ct值38或无Ct值，无明显指数增长或平台期。
样本检测结果：Ct值<35，表示样本中检测到婴儿利什曼虫，结果为阳性；Ct值38或无Ct值，表示样本未检测到婴儿利什曼虫，结果为阴性；若Ct值在35-38范围，应进行复检，如重复实验结果仍在此范围且有明显指数增长，则判定为阳性，否则判定为阴性。

### 运输及保存

本产品需低温运输，存储在-20℃，保存期限为一年。阳性对照需单独存放，避免污染其他试剂。