## 人β干扰素(IFN-β) Elisa试剂盒使用说明

尊龙凯时提供的人β干扰素(IFN-β) Elisa试剂盒专用于科学研究，严禁用于医学诊断。

### 检测原理

本试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。步骤包括：将预先包被adropin（AD）抗体的微孔板中依次加入样本、标准品和HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤后，使用TMB底物显色。在过氧化物酶的催化下，TMB由蓝色转变为黄色，其颜色深浅与样品中的adropin（AD）浓度呈正相关。最终通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），进而计算样品浓度。

### 样品收集与处理方法

1. 血清：使用无热原和内毒素的试管，操作过程中避免细胞刺激。收集血液后进行3000转离心10分钟，迅速分离血清与红细胞。

2. 血浆：采用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝，3000转离心30分钟后取上清。

3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4. 组织匀浆：将组织与生理盐水混合搅拌均匀，3000转离心10分钟后取上清。

5. 保存：如不及时检测，样本请分装后冷冻保存于-20℃，避免反复冻融。在室温下解冻并确保样品完全均匀。

### 自备物品

• 酶标仪（450nm）
• 高精度加样器及枪头（05-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL）
• 37℃恒温箱

### 操作注意事项

1. 试剂盒需在2-8℃保存，使用前需在室温下平衡20分钟。结晶现象正常，需加热到完全溶解后使用。

2. 未使用的板条应立即放回自封袋中密封存放。

3. 标准品（S0号）可视为阴性对照，样本已稀释5倍，最终结果需乘以5以得到实际浓度。

4. 严格遵循说明书内的操作时间、加液量及顺序。

5. 所有液体组分使用前请充分摇匀。

### 试剂盒组成

标准品浓度依次为：0、25、50、100、200、400pg/mL。

### 试剂的准备

20×洗涤缓冲液需按1:20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加入19份蒸馏水。

### 洗板方法

1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1分钟后再甩尽，最后在吸水纸上拍干，进行5次洗涤。
2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1分钟，洗板5次。

### 操作步骤

1. 从室温平衡20分钟后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋封好放回4℃保存。
2. 设置标准品孔和样本孔，各标准品孔加入不同浓度的标准品50μL。
3. 样本孔先加入待测样本10μL，再加入样本稀释液40μL；空白孔不加样本。
4. 在每个标准品孔和样本孔中加入HRP标记的检测抗体100μL，封住反应孔，并在37℃水浴温育60分钟。
5. 弃去液体，拍干后添加洗涤液，静置1分钟，再次甩去洗涤液，重复此步骤5次（也可用洗板机洗板）。
6. 在每孔中加入底物A、B各50μL，避光孵育15分钟。
7. 然后每孔加入终止液50μL，并在15分钟内测定各孔的OD值（在450nm波长处）。

### 结果判断

绘制标准曲线：在Excel中，以标准品浓度为横坐标，对应OD值为纵坐标，绘制线性回归曲线，并依据方程计算样本浓度值。

### 试剂盒性能

1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度的相关系数R值大于等于0.9900。

2. 灵敏度：最低检测浓度小于10pg/mL。

3. 特异性：不与其它可溶性结构相互作用。

4. 重复性：板内及板间变异系数均小于15%。

5. 贮藏条件：在2-8℃，避免光照和潮湿。

6. 有效期：6个月。

### 免责声明

1. 本试剂盒仅供研究使用，禁止用于临床实验或人体实验，任何因此产生的后果均由实验者承担，尊龙凯时对此不予承担责任。

2. 操作过程中请严格遵循说明书，有违反说明书的操作，后果由实验者自行承担。