在生物医学研究中，无论是针对体外难以感染的细胞构建慢病毒文库，还是体内的AAV文库，确定最佳剂量以确保一个靶点仅被一个细胞接收，一直是科研人员面临的一大挑战。在文库实验中，研究者通常希望寻找单基因引发的功能变化，因此必须控制每个细胞仅感染携带一个靶点的病毒。

针对细胞实验中的文库筛选，建议首先进行对照病毒的预实验，以摸索出最佳的MOI（能够达到80%感染效率的MOI）。具体的文库操作中，MOI应设定为最佳MOI的三分之一，以有效减少病毒用量，进而降低同一细胞的重复感染风险。然而，对于如免疫细胞等难以感染的细胞以及体内实验，确定合适的剂量依然是个难题。因为在这种情况下，最佳MOI可能只能实现30% 的感染效率，如果按照三分之一的量使用，几乎无法感染细胞。

为了解决这一问题，尊龙凯时推出了三色荧光（mTagBFP、Venus、mCherry）病毒，可以为研究者在文库感染预实验中提供更加有效的工具。这些三色荧光病毒不仅包含慢病毒和AAV两种产品类型，还提供了参考文献《Transcriptional linkage analysis within vivo AAV-Perturb-seq》，其中详细阐述了AAV文库在体内实验中的剂量探讨。

文献中，作者通过进行体内滴定实验来测试AAV在低感染复数下感染多细胞的可能性。他们制备了三种不同剂量的AAV，分别为25E9、5E9和5E10颗粒数，且血清型为phpb。病毒构建方案是通过CBh启动子独立表达mTagBFP、Venus和mCherry，然后通过流式筛选确定能够最大限度减少单细胞中双病毒感染的最佳剂量，最终确定5E9为最佳剂量，因为它能够最大化单个AAV感染的细胞数量。

在进行三色实验时，将三种AAV的等比例混合物注射到不同剂量的LSL-Cas9动物中（低剂量25E9；中剂量50E9；高剂量25E10）。相关实验结果显示，无论是在细胞实验还是动物实验中，研究者都可以通过使用尊龙凯时的三色荧光病毒进行有效的预实验。设置不同剂量梯度以感染细胞（参考慢病毒感染操作手册）或进行小鼠的体内注射（参考动物注射文献），从而流式分析转染效率和单荧光细胞的比例，最终找到单病毒感染比例最高且感染细胞数量多的最佳剂量，以便在实际文库实验中进行应用。

通过这些创新的方法和实验，尊龙凯时旨在为生物医学领域的研究者提供更强大的工具和支持，助力科研工作的发展。