甘油菌种复苏与保存步骤

甘油菌种的复苏和保存是生物医疗研究中的重要环节，涉及细菌培养和长期保存技术。该过程主要包括菌种的保存、复苏及再次保存，以下是详细的步骤和注意事项。

菌种保存

为了有效保存菌种，需要将其接种在LB液体培养基中，并在对数生长期（即当培养基显得浑浊时）进行保存。首先，需准备50%浓度的甘油溶液，方法为将等体积的蒸馏水与甘油混合。在无菌条件下，将活菌液与50%甘油按1:1比例混合，使最终甘油浓度达到25%。然后，将混合液转移至2ml离心管中，并存放于-20°C的冰箱中。在此条件下，菌种的保存有效期可达1年。如果需要长期保存，建议将样品冷冻至-70°C或-80°C，这样保藏时间通常可延长至2-4年。

菌种复苏

使用前，需要在30°C水浴中解冻保存的菌种。解冻后，将菌液接种于固体培养基上，并在适宜的条件下培养24-48小时，以有效恢复菌种活性。此步骤对于高品质研究至关重要。

再次保存

复苏后的菌种可以在新的液体培养基中继续培养，并进行甘油保存。这一过程确保了菌种的长期保存和可用性，对于生物医疗领域尤其重要。

注意事项

在整个操作过程中，需确保所有工具和容器都经过适当的灭菌处理，以避免污染。同时，保持无菌条件是防止外界微生物干扰的关键。正确的保存与复苏方法对于维护菌种的活性和纯度至关重要。此外，保存的温度对菌种的长期存活影响显著，低温条件有助于延长菌种的保存时间。

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